保存细胞样品的复苏中科博生

具中科博生研究表明，,在相同的冷冻速率，甚至是最适宜冷冻速率条件下，以不同的速率使样品融化复温，其存活率也会有很大的差别。

一般来讲，无论冷冻速率是快还是慢，快速复温样品的存活率均大于慢速复温的样品。快速复温的目的是使样品快速通过相变区，以防再度形成冰晶或离子浓度升高等因素对细胞的损伤。复温速度越快，对细胞的损伤越小。中科博生。

造血干细胞通常采用37℃水浴复温、复温速率在90～℃/min,这可以使冻存的细胞避免因胞内再结晶或细胞膨胀所致的机械损伤。将90℃/min的复温速率与2℃/min相比，前者可以明显提高骨髓细胞的活率。但是有些细胞，如冻存在高浓度甘油中的红细胞，行慢速复温比快速复温效果好。中科博生。

在复温过程中可造成不同程度的组织细胞的损伤，如蛋白质变性、脂类氧化、能量代谢紊乱和细胞体积的变化、细胞膜通透性的改变等。尤其是冰晶受执三两化过程中的再结晶，使细胞内冰晶数目增加、增大，渗透压的改变，均加剧了细胞的损伤。中科博生。

在-.6～-80℃,复温速率对冻存细胞的存活率无明显影响，面在-80~0℃的范围内，慢速复温的样品的存活率明显低于快速复温的样品。其原因是在此温度范围内，慢速复温时许多小冰品先融化、但其分子的自由能较大，因是件在尚未融化的较大冰品的表面，形成更大的冰品，造成对细胞的损伤、此即“再结晶”。冻存样品在复温过程中因再结品而造成的损伤称为“再结晶损伤”。含有不稳定的小冰品的样品由一℃升温到一40℃或-15C时，再结品作伤。程生。如将温度重新降回到一℃,再结晶就会停止，但是已经发生的用孙会逆转。为了避免这种与时间和温度有关的重结品作用的损伤，应该以极快的速率复温。中科博生。

快速升温对样品的存活很重要，但同时与样品的体积有关。试想，一块体积1的冰块和一块10ml的冰块同样在39℃水浴中融化复温，其结果是当然为，出冰已经融化了而大块冰还处于冰水并存的状态。复温时间延长，那么细胞是在浓缩溶液中的时间将延长，增加了产生有害化学反应的可能性。中科博生。

复温速率对细胞的存活率的影响，主要取决于冻存前的降温速率。

实验研究以超过最佳降温速率冷冻的组织细胞，用快速复温比缓慢复温要好。冻存及复温时，须将样品加热，样品则很快由零下温度快速上升到零上温度，冰开始融化，继续升温，此时样品温度升高缓慢。如冻存样品容量较多（超过ml),要使冰块完全融化，则复温时间更长。由于复温时样品在o℃左右停留时间较长，某些样品则可能开始发生化学反应。而在水浴加温时，由于存在样品面与中心的温度差，这种温度差在冷冻过程更明显，故对细胞存活率影响更大。有人采用微波加温方法，尽可能减少样品内外的温差，达到均匀复温的目的，可以提高细胞的存活率。

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